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白介素27ELISA試劑盒在使用時(shí)需要注意以下事項(xiàng)

日期:2025-02-20瀏覽:635次

  白介素27ELISA試劑盒是一種用于定量檢測(cè)樣本中IL-27濃度的試劑盒,基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。其原理是將特異性抗體包被在微孔板(或酶標(biāo)板)上,加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本,樣本中的IL-27會(huì)與包被抗體結(jié)合。然后加入生物素化抗體,該抗體會(huì)與已結(jié)合的IL-27發(fā)生特異性結(jié)合。接著加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素,生物素與鏈霉親和素會(huì)發(fā)生高強(qiáng)度的非共價(jià)結(jié)合。最后加入顯色劑底物TMB,若反應(yīng)孔中存在IL-27,則HRP會(huì)使無(wú)色TMB變成藍(lán)色物質(zhì),加入終止液后反應(yīng)孔會(huì)變成黃色。在特定波長(zhǎng)下測(cè)定反應(yīng)孔的吸光度(OD值),樣本中的IL-27濃度與OD值成正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣本中IL-27的濃度。
  白介素27ELISA試劑盒在使用時(shí)需要注意以下事項(xiàng):
  1、試劑準(zhǔn)備與保存
  平衡試劑:從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)在室溫平衡至少30分鐘,使試劑的溫度與室溫一致,避免因溫度差異影響檢測(cè)結(jié)果。未用完的酶標(biāo)包被板開(kāi)封后應(yīng)裝入密封袋中保存,防止板條受潮或污染。
  標(biāo)準(zhǔn)品處理:標(biāo)準(zhǔn)品液配制時(shí),要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行稀釋,且稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,不可保存。
  試劑混勻:使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,混勻時(shí)要避免產(chǎn)生過(guò)多的泡沫,以免產(chǎn)生加樣上的誤差。
  試劑保存:不同批號(hào)的試劑不要混用,且要按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定的條件保存試劑,通常需要在2-8℃冰箱內(nèi)保存。
  2、實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程
  樣本處理:收集的樣本應(yīng)盡早檢測(cè),若不能馬上檢測(cè),應(yīng)將標(biāo)本放于-20℃保存,但需避免反復(fù)凍融。對(duì)于血清、血漿樣本,要注意抗凝劑的選擇,EDTA、檸檬酸鹽、肝素等抗凝劑可用于血漿樣本的檢測(cè),但不同抗凝劑對(duì)檢測(cè)結(jié)果可能有一定影響,需根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇合適的抗凝劑。
  加樣:加樣時(shí)要使用一次性吸頭,避免交叉污染。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品的量要準(zhǔn)確,一般為100ul左右。加樣時(shí)要將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不要觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
  溫育:反應(yīng)板放入恒溫箱中進(jìn)行溫育時(shí),要保持溫度恒定,一般為37℃,并按照說(shuō)明書(shū)要求的時(shí)間進(jìn)行溫育,如30分鐘或1小時(shí)等。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  洗滌:洗滌過(guò)程很關(guān)鍵,洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。要使用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。如果使用洗板機(jī),需提前設(shè)置好洗滌次數(shù)和程序,確保每次洗滌都能有效去除殘留液體。
  顯色:顯色劑要在臨用前配制,且要在避光條件下進(jìn)行顯色反應(yīng),顯色時(shí)間也需嚴(yán)格控制,一般為15分鐘左右。顯色完成后應(yīng)立即終止反應(yīng)。
  終止與讀數(shù):加入終止液后要立即混勻,并在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)(通常為30分鐘內(nèi))用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

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