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?生發(fā)中心激酶樣激酶抗體技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟

日期:2023-06-28瀏覽:1269次

生發(fā)中心激酶樣激酶抗體技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟:


一、準(zhǔn)備好試劑與儀器:


磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。


二、實(shí)驗(yàn)步驟


1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上,十分鐘后棄去,使標(biāo)本保持一定濕度。


2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液,使其覆蓋標(biāo)本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。


3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地?fù)u晃振蕩。


4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標(biāo)本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。


5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。



抗體制備過程:


1.材料與試劑


a.提取的動(dòng)物 Ig


b.弗氏佐劑和弗氏不佐劑


d.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔


e.其它材料及試劑


2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。


3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。


4、試取血樣進(jìn)行測試,查看免疫效果。


5、如果免疫成功,殺死實(shí)驗(yàn)活體,采集全部血清。


6、純化出抗體。


7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)


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